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[求救] western blot transfer大問題

看板Biotech (生命科學)作者 (平常心)時間15年前 (2010/10/30 00:29), 編輯推噓3(3推 0噓 11→)
留言14則, 7人參與, 最新討論串1/1
最近跟同學一直在做WB 但卻都一直鬼打牆 我適用 濕轉置 BIO RED系統 transfer buffer使用前都會先滴定ph8.3附近 冰在4度 我夾片的順序是 菜瓜布 濾紙x2 gel membrane 濾紙x2 菜瓜布 定電流400mA 90min on ice 每次都是按造上面的流程 但 詭異的事情來了 當我跟我同學一起轉置的時候 通常兩片gel都會順利轉過 marker清楚的在membrane上 當我一個人只有轉置一片的時候 也都會成功 marker清楚的在membrane上 但是 當我一次轉兩片時 『有時候』 兩片都會成功轉過 但有時候只有一片轉過 另一片會出現marker不在gel, 濾紙或是membrane上＝＝ （都是transfer一結束就馬上取出，不會泡在buffer李太久） 硬著頭皮去壓片 也壓不出什麼東西來 非常的乾淨（actin都沒有） 至於染膠 是還沒用comassive blue染（心力憔悴） 只是真的想不透這到底是什麼問題 會讓這樣的狀況 很隨機的出現 想請問一下大家 -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.71.89
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10/30 00:45, , 1F
會不會是電流量不夠?? 1平方公分以25mA算 兩片的話可能電
10/30 00:45, 1F
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10/30 00:46, , 2F
流量應該不只需要900mA而已吧~
10/30 00:46, 2F
推
10/30 04:02, , 3F
電流不夠或transfer機器有問題 看有沒有接觸不良or沒夾緊
10/30 04:02, 3F
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10/30 09:08, , 4F
該不會是『有時候』其中一片方向放反了...XD
10/30 09:08, 4F
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10/30 18:14, , 5F
我有每次都有注意 有每有放反耶 應該不是這問題
10/30 18:14, 5F
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10/30 18:15, , 6F
我們家的POWER定電流最高只到400＝＝
10/30 18:15, 6F
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10/30 18:16, , 7F
我跟同學討論也有可能是夾不緊 可是每次感覺都有固定好
10/30 18:16, 7F
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10/30 18:17, , 8F
但有在考慮下次用橡皮筋 綁起來TRANSFER
10/30 18:17, 8F
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10/30 18:18, , 9F
不曉得有沒有人用過這個方法 很怕用橡皮筋又出現什麼問題
10/30 18:18, 9F
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10/30 18:45, , 10F
有用過象皮筋綁 ok的
10/30 18:45, 10F
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10/30 20:51, , 11F
這樣就安心一點了 下次來試試
10/30 20:51, 11F
推
10/31 13:01, , 12F
您用PVDF membrane? 沒做前處理吧.
10/31 13:01, 12F
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10/31 15:08, , 13F
有用METH浸泡5MIN
10/31 15:08, 13F
推
11/01 21:25, , 14F
buffer我記得pH本來就差不多在8.3附近 而不需要去調
11/01 21:25, 14F
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