PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] RNA萃取

看板Biotech (生命科學)作者 (悠哉的風)時間15年前 (2010/11/20 12:47), 編輯推噓6(6推 0噓 19→)
留言25則, 8人參與, 最新討論串1/1
我是用Kit去抽RNA，我直接跳到問題部分... 最後一步萃取時沒換tube，結果我的RNA跟水和酒精就很融洽的混在一起了... 我想問的是有沒有辦法去除酒精而不讓RNA降解掉 或是去除水而讓RNA沉澱的方法，當然同樣要避免RNA降解或變性 請板上各位先進大大幫幫忙嚕~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.194.204.47
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11/20 14:44, , 1F
如果你的RNA跟水和酒精會融洽的混在一起,那前一個步驟過酒
11/20 14:44, 1F
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11/20 14:45, , 2F
精時,就已經一起被沖下來了
11/20 14:45, 2F
推
11/20 19:27, , 3F
試試酒精沉澱後重新回溶?
11/20 19:27, 3F
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11/20 21:52, , 4F
是混到舊tube中的酒精(之前wash buffer含的)
11/20 21:52, 4F
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11/20 21:54, , 5F
怎麼酒精沉澱?大家就已經和樂融融的在一起了@@"
11/20 21:54, 5F
推
11/20 23:13, , 6F
和樂融融在一起?!你不知道RNA不溶於酒精嘛!?怎麼和樂融融
11/20 23:13, 6F
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11/20 23:14, , 7F
把那堆東西加isoprepanol重新沉澱嚕~
11/20 23:14, 7F
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11/21 00:07, , 8F
雖然RNA不溶於酒精，但溶於水啊，酒精是極性溶劑和水
11/21 00:07, 8F
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11/21 00:07, , 9F
溶在一起是很合理的
11/21 00:07, 9F
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11/21 00:13, , 10F
異丙醇溶水和酒精，雖不溶RNA，但同樣沒法拉出RNA
11/21 00:13, 10F
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11/21 00:13, , 11F
就是因為有水QQ
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11/21 00:16, , 12F
甲苯雖可以溶酒精不溶水，但是會使RNA降解...
11/21 00:16, 12F
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11/21 01:26, , 13F
上述都不是問題,你缺乏一般RNA extraction protoc操作經驗
11/21 01:26, 13F
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11/21 01:27, , 14F
請wiki ethanol precipitation
11/21 01:27, 14F
推
11/21 01:39, , 15F
的確是用絕對酒精或者異丙醇可以沈澱核酸喔
11/21 01:39, 15F
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11/21 01:41, , 16F
異丙醇之前學到的要加等體積，絕對酒精是用2倍體積或者加點
11/21 01:41, 16F
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11/21 01:42, , 17F
高濃度鹽，可以參考molecular cloning~~詳細原理其實我也不
11/21 01:42, 17F
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11/21 01:42, , 18F
太了解....
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11/21 01:43, , 19F
之前有同學抓RNA有用isopropanol 4度抓O.N.的，據說抓下來濃
11/21 01:43, 19F
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11/21 01:44, , 20F
度高，但是斷的也比較多...我想你還是重萃好了，RNA不好保存
11/21 01:44, 20F
推
11/21 01:46, , 21F
回頭看了一下，有點不太懂，你的例子解決不就是再過一次
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11/21 01:47, , 22F
column就好了？？只是可能回收率不高，RNA濃度低而已？
11/21 01:47, 22F
推
11/21 11:48, , 23F
請問那用phenolchloroform呢??
11/21 11:48, 23F
推
11/23 22:05, , 24F
Y大是正確的 請加入2X體積絕對酒精和1/10X的3M NaCl
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11/25 21:34, , 25F
謝謝啦~
11/25 21:34, 25F
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