[求救] 菌長不起來

看板Biotech (生命科學)作者 (情人去死)時間15年前 (2010/11/27 12:48), 編輯推噓1(1012)
留言13則, 6人參與, 最新討論串1/1
我要抽大量的plasmid 同一個plate, 剛transform後,同一批Amp,只是有配新的LB, 但LB powder是kit,1L/25g,配法沒變, 上次轉大量有成功, 有凍(500ul 50%glycerol+500ul菌)一管起來 我的plasmid是買來的,之前的經驗是, DH5a transform後隨便挑都長,也都有表現, 最近,從4度C cold room拿plate出來,十天前transform的plate 挑一些,種小量4ml,有時候長,有時候不長QQ, 有變得非常混濁的時候,抽plasmid,有,digest, pattern ok 從原本小量裡面吸個20ul,轉到另一管小量,搖個八小時,不長QQ 拿原本那管,重新搖八小時,有變濁,轉大量(200ml+400ul),隔天又不長 想不出到底是啥原因,有人有這種奇怪的經驗嘛? 是因為從4度C一拿出來,要讓他wake up嘛? 還是我乾脆拿凍菌出來養? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.40.60

11/27 17:15, , 1F
可以先重新劃在plate上~再挑single colony看看
11/27 17:15, 1F

11/27 17:16, , 2F
不然就重新transform吧 最保險
11/27 17:16, 2F

11/28 09:14, , 3F
你們實驗室對菌種保存都放在盤子上嗎..
11/28 09:14, 3F

11/28 09:22, , 4F
我學姐她電完菌後會養6公升(OD600=0.6) 離心放-25度
11/28 09:22, 4F

11/28 09:23, , 5F
要養在挖一點出來放大 一直用到覺得表現量開始下降時
11/28 09:23, 5F

11/28 09:23, , 6F
再拿DNA重電一匹
11/28 09:23, 6F

11/28 09:32, , 7F
不過我不知道別人是怎麼做 她不喜歡放盤子上這麼久
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11/28 11:35, , 8F
6公升不會太多了嗎@@
11/28 11:35, 8F

11/28 12:57, , 9F
這...因為消耗的很快...
11/28 12:57, 9F

11/28 23:52, , 10F
4度C放10天的菌不好吧 凍菌的保險多了
11/28 23:52, 10F

11/29 02:08, , 11F
有這麼大的瓶子可以養菌喔...感覺就很嚇人
11/29 02:08, 11F

11/29 04:55, , 12F
6*1L
11/29 04:55, 12F

11/29 13:03, , 13F
放盤子會死掉喔 建議菌液加glycerol凍在-80
11/29 13:03, 13F
文章代碼(AID): #1Cy8sSTC (Biotech)
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