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[求救] PCR Tm值設定

看板Biotech (生命科學)作者 (!!!!!!)時間14年前 (2010/12/01 14:18), 編輯推噓5(5推 0噓 5→)
留言10則, 4人參與, 最新討論串1/1
在設定PCR program的時候會需要參考PRIMER的Tm值， 不過最近有時候再找一些commercial的primer時， 發現他們建議PCR program溫度設定的比Tm高很多，高出10幾度， 不知道這樣的設定是為了甚麼因素? 最近有一組primer 造他們建議的program設定跑不出來， 想說是不是回歸比較簡單的思考方向只在乎primer本身的Tm值， 不要用他們建議的program跑。 EX: primer Tm值 只有53度 program建議跑 94度->68度->72度 這樣的cycle -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.173.216 ※ 編輯: fcku413 來自: 140.113.173.216 (12/01 14:19) ※ 編輯: fcku413 來自: 140.113.173.216 (12/01 14:19)
推
12/01 19:38, , 1F
通常是Tm正副5度內，看你片段長，再決定黏合時間長短
12/01 19:38, 1F
→
12/01 19:39, , 2F
溫度越高專一性越高，溫度低會亂黏，可以TRY看看
12/01 19:39, 2F
推
12/01 19:48, , 3F
68都可以annealing了，條件其實要自己try
12/01 19:48, 3F
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12/01 19:50, , 4F
如果primer是用程式跑出來的，我會按照程式的溫度
12/01 19:50, 4F
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12/01 19:50, , 5F
但如果是paper的 除了廠商建議的溫度外，我也會自己算
12/01 19:50, 5F
推
12/03 14:15, , 6F
elongation
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12/03 14:15, , 7F
gradient pcr GO
12/03 14:15, 7F
推
12/04 12:37, , 8F
事實上Tm值跟設定的黏合本來就完全關係 XD
12/04 12:37, 8F
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12/04 12:38, , 9F
所以建議你最好就是做個gradient PCR嚕~
12/04 12:38, 9F
推
12/05 00:18, , 10F
噗哧...剛剛才發覺我打錯了，是elongation啦XDDD
12/05 00:18, 10F
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