[閒聊] real time PCR 每反應所需最低總體積?

看板Biotech (生命科學)作者 (Goodday)時間15年前 (2010/12/26 13:00), 編輯推噓7(705)
留言12則, 10人參與, 最新討論串1/1
現在我用power SyBR, ABI 的儀器在做 real time PCR 由於每個反應總體積越大花錢當然越多 所以想問說實驗可以進行的最低總體積是多少? 反應總體積會影響實驗結果嗎? 目前我用每個反應總體積20ul 感謝您的分享~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.14

12/26 14:46, , 1F
10ul應該還可以,自己試試看吧。
12/26 14:46, 1F

12/26 15:32, , 2F
10ul影響不大 相對定量的話沒甚麼關係
12/26 15:32, 2F

12/26 15:48, , 3F
我有問過原廠 體積建議不要太小
12/26 15:48, 3F

12/26 18:22, , 4F
如果想省錢,自己買sybr green配reaction mix是最省的.
12/26 18:22, 4F

12/26 20:31, , 5F
我們LAB用 total 15 ul SYBER GEEN 7.5 ul
12/26 20:31, 5F

12/26 23:07, , 6F
理論上來說,體積愈小,pipetting error的影響會愈大
12/26 23:07, 6F

12/26 23:08, , 7F
如果只是用來判斷陽性或陰性的話,12左右都ok
12/26 23:08, 7F

12/26 23:09, , 8F
但如果是用來精確定量的話,最好還是用25以上,減少變異
12/26 23:09, 8F

12/27 17:20, , 9F
看用什麼plate。96well的有人用到10 ul total
12/27 17:20, 9F

12/28 13:31, , 10F
我們實驗室 96-well=>10ul 384-well=>6ul
12/28 13:31, 10F

12/29 11:06, , 11F
我也都減半使用 ok的 (lightcycler)
12/29 11:06, 11F

12/30 01:10, , 12F
我們Lab也是用10ul
12/30 01:10, 12F
文章代碼(AID): #1D5im0v_ (Biotech)
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