[方法] FLOW抗體

看板Biotech (生命科學)作者 (妮)時間15年前 (2011/04/11 00:55), 編輯推噓1(106)
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請問一下 上FLOW的抗體如果是需要另外接2抗的 有版友知道詳細步驟該怎麼做嗎? 我之前是1抗2抗一起加,染色30分鐘 (說明書上都不會寫時間,所以我都是以以前染色經驗去做的) 原本是希望結果能有不同比例陽性跟陰性2個peak 但通常有染色的那管都是peak完全偏移 沒出現第2個peak 這樣分析出來的結果,陽性率都很高Orz 但參照ref,通常陽性率不會那麼高 所以想請問有經驗的板友 可以說說步驟嗎? 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 58.114.177.243

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先染biotin-layed的抗體再染streptavidin接螢光的抗體
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也就是1抗2抗分開染,我會各染20min吧!
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按理說 任何染色都不能一二抗同時加 那會減低染色效率
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一抗先染完後 清洗乾淨 離心 再下二抗
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我的經驗是一抗一個半小時,反應完先離心,抽掉上清液
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再加入二抗反應一個半小時,抗體反應時都在慢速的shaker上
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我都是放在4度C冰箱,記得二抗要避光喔
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文章代碼(AID): #1DeU3jzU (Biotech)
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