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[求救] DNA digist後消失?

看板Biotech (生命科學)作者 (su ki ....)時間15年前 (2011/04/21 11:59), 編輯推噓8(8推 0噓 28→)
留言36則, 12人參與, 最新討論串1/1
想請問各位大大 是否有人在DNA用酵素切完之後 拿去測OD 值都不錯(~0.1 microgram/microliter) 260/280都有1.8以上 可是跑膠卻都沒看到東西 請問可能是什麼情況呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.123.85.131
推
04/21 12:22, , 1F
1.你OD測的有問題，其實你那個濃度也不算太濃，是背景值的
04/21 12:22, 1F
→
04/21 12:22, , 2F
可能性不小。
04/21 12:22, 2F
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04/21 12:23, , 3F
2.用的酵素會不會切到你的DNA product
04/21 12:23, 3F
推
04/21 12:31, , 4F
會不會忘記放EtBR
04/21 12:31, 4F
推
04/21 12:34, , 5F
看你加多少DNA量作用。再來就是loading 的DNA量~
04/21 12:34, 5F
推
04/21 13:22, , 6F
有人「切完之後」在測OD的嘛？不準阿= =
04/21 13:22, 6F
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04/21 13:36, , 7F
切之前有測過嗎？
04/21 13:36, 7F
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04/21 13:46, , 8F
切之前有測過有~差不多也0.1-0.2
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04/21 13:46, , 9F
切之前也有跑膠~蠻亮的!
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04/21 13:47, , 10F
load gel=2 microliter
04/21 13:47, 10F
推
04/21 13:52, , 11F
DNA來源是什麼?plasmid?
04/21 13:52, 11F
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04/21 13:54, , 12F
細胞total DNA
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04/21 14:15, , 13F
細胞total genomic DNA這樣會不會太低了點壓??
04/21 14:15, 13F
推
04/21 19:36, , 14F
下多少量的DNA去切?作用體積？切完後是loading 2 ul?
04/21 19:36, 14F
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04/21 19:38, , 15F
切genomic的話，量要下的多，跑膠才會看到smear，不然會很淡
04/21 19:38, 15F
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04/21 19:49, , 16F
總共用10 microgram去切 總體積70 microliter
04/21 19:49, 16F
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04/21 20:49, , 17F
放成dnase了= =?
04/21 20:49, 17F
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04/21 20:55, , 18F
會不會用錯buffer 產生 "star activity"?
04/21 20:55, 18F
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04/21 21:36, , 19F
buffer應該沒錯~照原廠的protocol 除了一個ZnSO4換Zncl2
04/21 21:36, 19F
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04/21 21:37, , 20F
因為實驗室只有這種~不過應該沒差別這麼大吧?
04/21 21:37, 20F
推
04/21 23:11, , 21F
那我覺得你應該是loading gel量太少所以看不見～
04/21 23:11, 21F
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04/21 23:12, , 22F
因為是genome，所以會是smear~當然量多才會看的比較清楚
04/21 23:12, 22F
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04/22 13:35, , 23F
load 10 microliter一樣也沒看到@@
04/22 13:35, 23F
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04/22 13:56, , 24F
你要做什麼實驗? genomic southern?
04/22 13:56, 24F
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04/22 14:03, , 25F
先把實驗目的描述清楚會不會比較好抓原因
04/22 14:03, 25F
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04/22 14:04, , 26F
假設你要做genomic southern 就我的經驗是要下10ug DNA
04/22 14:04, 26F
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04/22 14:06, , 27F
final volumn 20ul 這樣看來你的genomic DNA濃度太低了
04/22 14:06, 27F
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04/22 18:56, , 28F
1ug 跑 genomic DNA 會分散成n個片段 一定看不到的啊-.-
04/22 18:56, 28F
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04/22 18:56, , 29F
你下的量 是跑plasmid的量
04/22 18:56, 29F
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04/24 23:47, , 30F
那要下多少才看的到呢?
04/24 23:47, 30F
推
04/25 01:41, , 31F
你要不要附上電泳圖？切之前genomic DNA電泳(量要註明一下)
04/25 01:41, 31F
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04/25 01:42, , 32F
切之後的電泳圖，操作及添加量標示清楚
04/25 01:42, 32F
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04/25 01:45, , 33F
其實真的很有可能是注入量太低所以看不見啦～或許你final作
04/25 01:45, 33F
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04/25 01:46, , 34F
用體積減少，或者增加作用的DNA量，盡可能loading多一點
04/25 01:46, 34F
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04/25 04:57, , 35F
切之前去跑膠看看 我有遇過很難搞的plasmid
04/25 04:57, 35F
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04/25 04:58, , 36F
OD數值跟curve都挺正常 卻跟電泳對不起來 PS:我不是新手
04/25 04:58, 36F
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