[求救] 限制酵素的buffer

看板Biotech (生命科學)作者 (小狐)時間15年前 (2011/04/21 12:22), 編輯推噓2(207)
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又來詢問板上的高手了 >"< 我目前是要用 Hind III 和 Xba I 去切PCR產物 (在primer上有設計切位) 因為只會切掉一點點 所以無法用跑膠的方式確認 質體也是做同樣的處理(被切掉的大小約500bp) 問題來了因為用的酵素是Takara的 雖然兩種酵素都是用 M buffer 可是 Xbal I 卻要加 BSA 我之前是用減半的BSA去反應 但是質體和我要的片段做ligation之後 再transform 之後大量表現 卻完全沒有長 究竟我該加入全量的BSA 還是不要加 或者只能分開切了呢?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.37.134

04/21 12:36, , 1F
加BSA一起切沒關係~另外老問題primer有空幾個mer嗎
04/21 12:36, 1F

04/21 13:37, , 2F
加正常量BSA即可
04/21 13:37, 2F

04/21 13:38, , 3F
直接PCR產物切去接一直作不出來的話 建議先做個TA
04/21 13:38, 3F

04/21 13:38, , 4F
再用酵素切出去跟VECTOR接
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04/21 14:11, , 5F
空幾個mer 是什麼意思呢 @@a
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04/21 16:34, , 6F
就是說你在PRIMER切位前端還要加上幾個無意義的MER
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04/21 16:37, , 7F
加幾個gcgc就行了。e.g.: gCgCgAATTC-so on
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04/21 16:37, , 8F
讓酵素有地方站 EX: xxxx-Xbal I-xxxxxx
04/21 16:37, 8F

04/21 17:10, , 9F
感謝大家!! 我會再試試
04/21 17:10, 9F
文章代碼(AID): #1Dhx4WaU (Biotech)
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