[求救] IHC 問題急救!

看板Biotech (生命科學)作者 (丹特)時間15年前 (2011/04/27 21:49), 編輯推噓4(402)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 各位前輩好,最近開始試做IHC 有很多事情不知道是不是應該要注意... 我們實驗室用的retrieval方法為sodium citrate buffer (10mM PH=9) 然後隔水加熱(聽說有人是用微波盧)到95度以上30min 然後就讓他放冷做接下來的步驟...這個protocol都做得出來我們要看的東西 只是因為今天實驗有點多 所以在放冷的部分我放了約4個小時... 所以這次染出來的很不明顯(前一次染都很明顯) 因為我想retrieval主要是使PFA造成的masking現象消失(打斷binding) 使結合位露出來讓我們的抗體可以上上去 所以我只是在想,4個小時真的可以讓我們剛打斷的建結又結回去?? 還是各位認為不是放冷時間的關係? 希望前輩可以給在下一點寶貴的建議(鞠躬) -- 期末強片: 1.驚奇四修人 2.死當筆記本 3.不能過的祕密 4.重修狀 5.當二一來敲門 6.驚天動地59分 7.把學分找回來 8.沒過黑幫 9.有學分真好 10.現在,很想當你 11.賜零 12.穿越年假擋修你 13.全面重修 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 115.43.211.7

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我之前是用微波爐 3min>>2min 隔水流水冷卻20min
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這四個小時內 你有放到乾掉嗎?
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而且用的citrate buffer pH=6
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04/28 07:52, , 4F
citrate buffer應該要調成pH=6吧!!
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04/28 09:13, , 5F
citrate buffer有分6.0跟9.0兩種,看你要做的實驗去調整
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05/13 10:04, , 6F
我還以為pH9的是tris EDTA
05/13 10:04, 6F
文章代碼(AID): #1Dk1y6Vv (Biotech)
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