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[討論] SDS-PAGE幾個問題

看板Biotech (生命科學)作者時間15年前 (2011/05/02 23:04), 編輯推噓9(9推 0噓 5→)
留言14則, 7人參與, 最新討論串1/1
1. protein處理完用sample buffer煮 這個步驟是要把雙硫鍵打斷? 還有煮沸時間我看過protocol長的有人說15分鍾 短的3分鐘 3分鐘的反應時間夠嗎 大家通常都用多少時間 2.如果想要把protein denature但不想把雙硫鍵打斷 是不是sample buffer不要加 b-me和DTT 就可以了? 那煮沸呢 我爬文有人說要煮 有人說不用 也就是說SDS不須要到100度 就可以使protein變性 那如果不煮的話 SDS須要多少反應溫度和時間 才可以使protein denature呢 問題有點多 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.104.99.183
推
05/02 23:12, , 1F
2-ME才斷雙硫鍵,只煮不加2-ME不會斷
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推
05/02 23:12, , 2F
我煮5分鐘～第二個問題不曉得，但如果跑native的，記得是不
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→
05/02 23:12, , 3F
加SDS（忘了，也只跑過一次）
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05/02 23:13, , 4F
然後SDS據我所知，不用加熱就可以denature了，所以破細胞
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05/02 23:14, , 5F
lysis buffer大都用它
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推
05/02 23:55, , 6F
98度8MIN
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推
05/02 23:58, , 7F
煮的時間真的是隨意，多煮幾分鐘也不會有什麼變化
05/02 23:58, 7F
推
05/03 00:58, , 8F
推樓上~只要不要煮到乾掉or沈澱物產生(鍋巴)即可
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推
05/03 09:43, , 9F
其實不煮也沒差...SB裡面的SDS很夠了
05/03 09:43, 9F
推
05/03 23:25, , 10F
我煮10min
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推
05/04 02:36, , 11F
SDS是detergent,只能打斷非共價鍵結,加2-MEorDTT
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05/04 02:38, , 12F
斷雙硫鍵,可以使有(雙硫鍵)四級結構protein,回到一級.
05/04 02:38, 12F
推
05/04 02:42, , 13F
native gel不加SDS但還是會加2-ME吧!這樣所有的
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05/04 02:43, , 14F
protein sample,才能都處在一級結構跑電泳分離!
05/04 02:43, 14F
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