[求救] western的running和壓片
http://img705.imageshack.us/g/dsc00711ta.jpg/
1.loading的問題 近一個月做的實驗在running時都會有殘餘東西在每個well上
黑黑灰灰的 本來以為是sample煮完後太熱*(sample煮30min) 所以我接下來煮完後
會將sample 放在冰上十分鐘 結果還是一樣 也有曾經懷疑是dye的問題
但是過濾後情況依舊 在想會不會是loading太多sample*(我loading 200ug)
這個還沒試不知道 但是一直試時間一過就是一個月 心理有點急了
實在不知道這樣的問題在哪邊 不知道有沒有先進遇過同樣的問題
(再試下去我看我就來不及口試了...)
2.壓片的問題 就如同圖中那張海苔一樣 我搞不懂為啥會這樣 囧
本來以為是一抗的問題重泡結果居然一樣 二抗也重泡過 結果都一樣 囧
搞不懂是因為我已經有N了 且實驗過程都一樣 除了最近在running出現的疑似遺留物
怕提供的資料太少 我稍微說一下我的流程好了
處理完sample, 定量(200ug), 煮30min,放冰上十分鐘, loading, run 30min 90v
then 1hr 120v 讓55跑到底(我看pAMPK 63kda),transfer 70 min 90V
(35min換一次冰),blocking(5% milk) 30min, wash 3x10 min in TTBS,
一抗 pAMPK 1:1000 in 5% milk 溶劑是用TTBS over night 4度C, wash 3x10 min,
二抗 室溫 2hr, wash 3x10 min, 壓片... 感謝讀完的人 現在頭在燒的人留
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.80.190
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