[求救] DNA銀染染不出band
現在實驗在做DGGE,之前是用EtBr染色
後來發現有些band濃度太低染不出來改用銀染
做法為:
1.將膠片用RO水沖洗過一次,浸泡 0.1% AgNO3, 20min
2.以RO水沖洗兩遍,浸泡RO水, 1min
3.膠片取出加入呈色液 (0.01% NaBH4 + 1.5% NaOH + 0.4% 福馬林)
搖晃約30秒(膠片邊緣變淡褐色)
4.以RO水沖洗兩遍,浸泡0.75% Na2CO3, 1-3hr至band顯現
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現在遇到的問題是,都使用同樣條件及樣品,卻偶爾才染的出band...
染不出來時就是整張膠片變黃色,完全看不到band,有時膠片會變得有點白白的不透明
另外有時band會反白,在背景是黃色時band看起來是透明的,降低樣品濃度時就都不見了
有人知道問題出在哪裡嗎?
已經完全失去信心了...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.98.52
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