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[求救] RNase A treat

看板Biotech (生命科學)作者 (..)時間14年前 (2011/06/23 12:39), 編輯推噓6(6推 0噓 5→)
留言11則, 8人參與, 最新討論串1/1
因為在 extract plasmid 並 digest 後， 跑電泳時 bands smear的很嚴重 老師認為應該是因為 RNA 沒有處理乾淨 所以叫我用 RNase A 去retreat 我看一般使用的 protocol 好像有說到 treat　完後要使用 PCI 才不會影響後續實驗 但是我接下來要做的是 gel extraction 和 ligation 那麼 PCI 的步驟是否還是必要的呢??? 謝謝大家的指導 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.79.51
推
06/23 13:28, , 1F
請問你是怎麼抽plasmid的 未加RE digest的DNA有smear嗎
06/23 13:28, 1F
推
06/23 13:40, , 2F
看你是要切來幹麼的...其實RE digest時加Rnase也行
06/23 13:40, 2F
推
06/23 13:42, , 3F
對阿我們都和在solution 1裡面
06/23 13:42, 3F
→
06/23 13:42, , 4F
不過電泳應該就會把protein跑開了啦
06/23 13:42, 4F
推
06/23 15:09, , 5F
有做clean up 或是gel extraction 純化後即可
06/23 15:09, 5F
→
06/23 15:10, , 6F
不過抽的plasmid如果smear太嚴重的話.. 步驟應該也有問題@@
06/23 15:10, 6F
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06/23 15:52, , 7F
我怎麼覺得是RE digest的問題...
06/23 15:52, 7F
→
06/23 19:37, , 8F
謝謝各位提供的意見 但RE不就加一加嗎 會可能有什麼問題呢
06/23 19:37, 8F
推
06/23 19:39, , 9F
......是加一加沒錯啦...但是他在裡面作用問題可多了...
06/23 19:39, 9F
→
06/24 00:58, , 10F
PCR也是加一加啊!! 但是就是會P不出東西來，問題多的很...
06/24 00:58, 10F
推
06/24 21:16, , 11F
建議用kit抽 現在mini都蠻便宜的 速度快品質也很穩定
06/24 21:16, 11F
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