[求救] 關於DPPH自由基檢測方法

看板Biotech (生命科學)作者jj5110 (大同牌電子鍋)時間14年前 (2011/06/25 18:42)推噓0(0推 0噓 4→)

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各位好最近要做蝦紅素抗氧化能力的檢測知道有一種檢測抗氧化活性方法叫"DPPH" 老師他有拿一罐DPPH溶液給我了(只知道他是DPPH+甲醇，濃度我不知道) 我照著期刊比例加入代測物，室溫30min後517nm，結果卻都不同(三份期刊加入比例都不同) 以下我就用代號簡稱，麻煩高手幫我解惑 A(DPPH+甲醇) B(蝦紅素各標準品濃度) 先是 1期刊 A:B = 250μL: 50μL 2期刊 A:B = 300μL: 50μL 3期刊 A:B = 200μL: 50μL 問題一這三份期刊的比例我都照著做，30分鐘後發現517nm照射下，居然吸收度都比原先空白DPPH 溶液還高(個人研判，是不是B濃度太高，A濃度太低，以至於蝦紅素吃掉了DPPH)，請問為何? 問題二如果一切實驗方法都正確，是不是"照理說"，高濃度的B越會讓DPPH吸收度下降? 問題三如果是用不同濃度標準品做出來的結果，"通常"圖中X與Y軸(濃度與抑制率)會是跟"檢量線"一樣有著線性的R值(也就是說濃度越高抑制率越高，並且等比例直線上升)，還是會呈現"急升後開始緩慢"(隨濃度越高，抑制率變成愈來越緩慢上升)直到最後不管濃度提高到多高，抑制率都平行(達到飽和) 問題四用此方法好像都是以 IC50為判斷點(抑制率超過50%時的濃度是多少)，可是這好像也跟 DPPH的濃度有關是不是? 因為同樣IC50時，DPPH如果濃度越高，B卻需要越高濃度才可以達到IC50(問題四如果有任何說錯，請糾正我) 問題五所以一開始我不知道DPPH濃度的缺點就是，有可能B濃度太高(比DPPH濃度高)，導致測517 nm時，因為B都把DPPH吃光光了，測出來的吸收度反而是測到B的，這樣說是對的嗎? 如果是對的，應該要先測此DPPH溶液的吸收度，然後再以"不超過此DPPH吸收度"加入低於此吸收度的B濃度，才有可能正確謝謝大家 ※ 編輯: jj5110 來自: 210.240.249.162 (06/25 20:17)