[求救] 酒精誘導發炎反應步驟?
首先感謝花點時間進來看的各位
最近老闆叫我做"酒精誘導發炎反應"的實驗
大致內容為:酒精treat HepG2細胞，然後要看看我們的藥物是不是可以抑制發炎反應
看了一些文獻期刊~很少說到如何操作這類的實驗
然後由兩篇期刊中說:同時treat 酒精跟藥物 24hr
就可以做接下來的實驗了(抽RNA)
所以我依照期刊內容做了以下實驗步驟~請各位幫我看看哪邊有問題~拜託指導
1.將HepG2貼在24well plate中 每well細胞:1x10^5顆
2.隔天去除原medium,加入含有酒精(J.K.Baker分生用)和藥物的medium
(酒精最終濃度為100mM)
3.24hr後收取total RNA
4.轉RT~做QPCR偵測發炎相關基因表現(TNF-a,IL-1b,cox-2,NFkB,iNOS)
我的結果主要是酒精無法或很少induce這些基因的表現><
有做過類似實驗的人可以幫我解惑嗎?拜託~~感謝
P.S.我的酒精算法為:純酒精 分子量:46.07 密度:0.789g/cm^3 (25度)
所以 莫耳數:789/46.07=17.1
體機莫耳濃度為:17.1M
working濃度算法: M1V1=M2V2
17100*X=1200 *100
(medium) (最終濃度100mM)
X=7 所以我是1193ulmedium+7ul酒精
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