[討論] 用Trizol抽DNA

看板Biotech (生命科學)作者somn (somnambulism)時間14年前 (2011/11/21 16:27)推噓2(2推 0噓 5→)

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如題本來我們家的Trizol都是抽RNA用 (廢話..= = 最近剛好有要抽rat cultured cell的DNA 因為剛好說明書裡有說可以~ 就順道想說試一次也好前半部到phase separation為止步驟都跟抽RNA時一樣還沒啥問題重點是...分層之後 (盡量的拿掉最上清液後) 它說要加 100% ethanol 可是我們之前買的實驗用酒精都是寫99.99% 這樣應可以吧!? 接下來DNA Wash 就更霧煞煞了首先是wash solution的配製它說要0.1M sodium citrate in 10% ethanol 問題是...那10% ethanol是溶在?? 水裡嗎? 然後更不幸的我們實驗室沒有sodium citrate... 這個Wash solution有沒有其它配方可以代替呢?! 然後溶出DNA是用8mM NaOH~ 給個大約量是用300~600λ per 不同細胞來源這邊沒什麼問題! 最後一個是保存方面說明上有寫說 for prolonged storage, samples should be adjusted with HEPS to pH 7~8 and supplemented with 1mM EDTA. 後面EDTA那句我看不是很懂... 因為照上段講的~ 用NaOH去溶要保存用HEPS去調pH值這還能理解可是加EDTA....是要怎麼加才能變成1mM ?? 因為到這一步為止 tube管子裡的體積已經有NaOH跟HEPS了因為總體積都是λ等級了如果要算出終濃度是1mM的EDTA 這....也太微量了吧 = = 且EDTA應該也是先泡成solution再加進去我不太懂到底是上面我標黃色字那一行字的意思到底是.....啥意思!? 雖然知道用Kit比較快但目前就是剛好沒Kit... 謝謝大家看完 = = -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.243.66