[求救] 一個 100 mm 的 dish 可以養多少細胞呢?

看板Biotech (生命科學)作者 (Tendin)時間14年前 (2011/12/09 01:13), 編輯推噓5(5022)
留言27則, 6人參與, 最新討論串1/1
第一次做細胞實驗,實驗室之前也沒有人做過細胞實驗, 所以我想問問各位前輩,進行正式實驗時,一個 dish 裡面可以養到多少細胞呢?因為之後還要跑 western, 不知道怎麼樣的細胞數會比較合適。 另外就是一個 dish 裡面需要含有多少體積的培養基呢? 而在細胞 lysis 時,需要加多少 lysis buffer 比較好呢? 麻煩各位前輩指點,也祝大家實驗順利。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 1.175.86.168

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不要養到全滿就好,體積大概5000~20000cells/mL去換算
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實驗前後細胞密度要一致
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以10 cm dish而言,通常加10~12 mL medium
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lysis buffer的部份要看廠商提供的protocol
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一般而言,細胞越大,密度越低;細胞越小,密度越大
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無論是seeding前或收細胞,上面的細胞濃度至少了一個數量級
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http://tinyurl.com/2eoa7d4 google cell culture
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我想用 3x10^6 顆不知道會不會太多?
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因為我的細胞在 96-well 可以 5x10^4 cells/well
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謝謝 conective,這對我很有幫助。
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可是因為我的試驗物質有點昂貴,我想說能不能省一點改
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用 5~6 ml 的 medium 呢?
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3三樓你很有錢喔!我都只加6ml而已!!
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你要看你的細胞大小.來決定你的western量.應該會定量吧!
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恩,會定量。 所以 medium 用 5 ml 應該也 OK 吧?
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抱歉我最前面打錯了,要加一個0。50000~200000 cells/mL
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我的sample也超貴(1 mg => 10k),但是你還是要統一細胞密
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度,我指的是你應該跟前面的任何實驗統一密度
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因此你medium少細胞也會少,western需要不少的細胞來提供
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足夠的蛋白,以我的Hep 3B為例,我濃度是50000 cells/mL
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1盤10 mL,CONTROL都一次重三盤全收,大概可以壓十次
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每次是50 ug
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這些問題實驗室前輩應該都有protocol吧~ 可以詢問看看~
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喔不好意思沒看到您的第一句話~ 抱歉~
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可以去問問隔壁實驗室?
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我養RAW cell, 10cm dish, ~90 confluent約3x10^7 cell
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文章代碼(AID): #1EuF0ceY (Biotech)
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