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[求救] transfer protein轉不過去

看板Biotech (生命科學)作者 (barbie)時間14年前 (2012/02/07 22:31), 編輯推噓2(2推 0噓 4→)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/1
我要看的protein在42~68KD之間 我用12%的SDS-page 之後用wet transfer(biorad) 45V,1.5hr或25V overnight membrance是使用PVDF(0.45)有浸泡methanol數秒 從55KD的protein就轉不過去了 請問我該怎麼辦?? 我的tramsfer buffr配方為 tris-base 3.03g,glycine 72g,methanol 200ml,PH8.3 順便我想請問我看大部份的人都是流電流 請問定電壓和定電流差別在哪 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.167.247.205
推
02/07 22:53, , 1F
我配方tris-base 3.03g,glycine 14.4g,methanol 200ml
02/07 22:53, 1F
→
02/07 22:55, , 2F
SDS 0.375g, 不需要調PH值. Transfer 0.5A, 40分鐘
02/07 22:55, 2F
→
02/08 00:36, , 3F
13724剛好有提到電壓跟電流的差別
02/08 00:36, 3F
推
02/13 02:02, , 4F
加個rainbow or see blue marker當control,如果marker轉得
02/13 02:02, 4F
→
02/13 02:03, , 5F
過去,那就是你antibody or ECL reagents的問題了
02/13 02:03, 5F
→
02/13 02:07, , 6F
不要局限在transfer上above條件和配方都可讓蛋白transfer
02/13 02:07, 6F
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