[討論] co-transformation的方法
最近看了三篇文章
J. Mol. Biol. 1983, 166, 557-580
J. Virol. 1996, 70, 4805-4810
J. Virol. 2000, 74, 505-512
這三篇是一串的，主要討論transformation
尤以最後一篇，貼近我目前打算做的東西
其中主要是講到兩條plasmid做homologous recombination
目前我有一條pTG5412長度約33Kb，已經順利transformation，並且純化plasmid
另外的就是clone了以pTCAV為載體的六條target gene，長度約2kb
我想要用homologous recombination的方式把我的target gene knock 到pTG5412上
可是問題來了
同學跟我說直接把兩條plasmid放到DK/E1-1細胞，做transfection
在細胞裡面就有homologous recombination
可是paper是提到要先將我的target gene從vector上先切出來(保留同原部分)
然後將pTG5412切成linear之後做transformation在E. coli裡面
產生homologous recombination之後
screen並purify DNA 之後再丟到DK cell做transfection
針對paper提到的transformation，
他們只提到把兩條linearize的DNA做transformation
並未提到方法
我於是就往上追了兩篇文章
就是第一篇，也只提到可以做co-transformation
只是相容性跟比例問題要兼顧
這裡就衍生了一個問題
我知道照作者的態度可能就是在transformation的過程當中，
加入兩條DNA，其他照舊
可是如果是這樣的話
我可以假設
因為我現在已經有含pTG5412的細胞
我可以針對這個細胞再做一次transformation嗎?
因為效率一定比co transformation還高
畢竟pTG5412的33Kb 真的快搞死我了
現在不但要再搞一次33kb還要再co transform另一條2kb的DNA
我不敢想像那個成功率有多低
但是這個做法有一個差異
就是那條pTG5412不會是linear form!!
可是，這樣子會影響homologous recombination嗎?
我是很想都試試看
可是老闆叫我停
要我想出一條正確的，然後再跟他報告
我看的書真的不夠多
所以我真的不知道上述的三種做法差別在哪裡?
transfection, co-transformation and re-transformation!!
我蠢了@@
有大哥大姐願意賜教的嗎??!!
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