[討論] 關於一個His-tag pull down的問題
請問大家一下
最近在做His-tag pull down assay
我把6H-A(A是我的蛋白質)加到cell lysate裡
反應完後加Ni2+ resin把6H-A抓下來
目地是想看a是否會跟其它蛋白質結合....
我bead洗完後直接加2X sample buffer拿去煮再連bead一起loading
我把a分子量附近的page切下來用CBR染色
結果我並沒發現a的蛋白質
(我納悶了好久..........我確定6H-A可以結合Ni2+ resin)
我能想到的惟一原因是a還結合在resin上並沒朝正極移動，
因為6H跟Ni2+結合能力很強
有沒可能是這樣??
若是這樣那下次恐怕得用imidazole elute出來再跑了
若不是..........我還真的一時想不到原因.....
謝謝
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