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[求救] 經由大腸桿菌增殖的質體會變大...?

看板Biotech (生命科學)作者 (阿左)時間14年前 (2012/04/15 01:48), 編輯推噓7(7推 0噓 10→)
留言17則, 9人參與, 最新討論串1/1
http://dl.dropbox.com/u/12159613/0415.png
(相機對焦沒對準請多包涵..) Lane3,4是3ml菌液抽完質體後切EcoRI的結果 從此批菌液再養大量到1L後取3ml出來抽質體切EcoRI結果為Lane1,2 發現較大的片段整整變大了快1k 但切出來的小片段似乎不受影響 菌種是DH5a , 質體是pGEMTeasy 1% gel in 1x TAE , DNA 染劑是 anla red loading dye 6x 這已經發生好幾次了，可是網路上怎查都沒有相似問題 只好來問問大家有沒有類似經驗了 我個人有點懷疑是DNA安全染劑的問題? 可是想不出關聯性... 懇請先進們解惑... 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.121.71.147
推
04/15 01:54, , 1F
看看你的plasmid是否有可能recombination
04/15 01:54, 1F
→
04/15 01:55, , 2F
DH5 alpha有recombinase，我們家會把這類質體換到Stbl2
04/15 01:55, 2F
推
04/15 01:58, , 3F
抱歉說錯，DH5 alpha是rec-
04/15 01:58, 3F
推
04/15 02:05, , 4F
恩 現在的幾乎是recA-
04/15 02:05, 4F
推
04/15 02:45, , 5F
commercial應該是啦，不過我們家都是自己做就是了
04/15 02:45, 5F
→
04/15 03:45, , 6F
菌液是單一菌相嗎?
04/15 03:45, 6F
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04/15 09:35, , 7F
定序，如果insert正確就不理它，因為這應該不是最終的質體
04/15 09:35, 7F
推
04/15 10:53, , 8F
pGENTeasy是promega的 TA vector 就像上面說的insert
04/15 10:53, 8F
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04/15 10:53, , 9F
對就不理好了
04/15 10:53, 9F
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04/15 14:12, , 10F
是DNA染劑的問題,而且不只大的,連小片段也都一起往上跑
04/15 14:12, 10F
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04/15 14:14, , 11F
是DNA染劑的問題,而且不只大的,連小片段也都一起往上跑
04/15 14:14, 11F
→
04/15 14:17, , 12F
尤其是像未純化的PCR產物在安全染劑跟BtBr的位置差異更明顯
04/15 14:17, 12F
推
04/16 10:49, , 13F
要不要調整Loading量，感覺你loading的很多，這樣也會影響
04/16 10:49, 13F
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04/16 10:50, , 14F
跑出來的位置，而且越大的SIZE越跑不開
04/16 10:50, 14F
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04/17 23:32, , 15F
=======感謝大家的建議,一個一個檢查後發現真的是染劑的問題
04/17 23:32, 15F
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04/17 23:33, , 16F
======用EtBr後 band恢復到原本的位置了
04/17 23:33, 16F
推
04/17 23:34, , 17F
有解有學到有推XDDD
04/17 23:34, 17F
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