[求救] 冷切包埋前先用PFA處理檢體?
最近有聽到一個方法是
在包埋OCT前組織先用PFA處理
要染色前section用macrowave antigen retrieval
之後再用2%的serum blocking
不知道有沒有版友是用這種方式
因為最近片子上的granules實在有點多
http://ppt.cc/xR(M
實驗方法之前有po過請神人校正
應該是沒啥問題
有試過改善方式:
1. wash久一點--->沒用
2. Fix條件更改: (1) Aceton 20% cool-->染色不均, 有雜質
(2) Aceton 100% cool->染色不均, 有雜質
*(3) PFA 4% RT--->染色較均勻, 有雜質顆粒 (現在使用)
(4) 0.4% gelatin+3% goat serum-->其他實驗室提供,目前在試條件
3. 1級抗體稀釋倍率: 1:200, 1:400, 1:800
^^^^^^^
現在使用
4. 2級抗體稀釋倍率: 1:500
但目前似乎還是沒辦法解決
所以想說該不會是從一開始包埋的方式就有問題
由於是人類檢體
都是由開刀房學姐幫忙包埋我再切片
現在的包埋是請學姐將組織清洗乾淨後
放進裝有oct的錫箔紙圓盒中
將紙盒放進含有少許isobutenal的罐子
(避免急速冷卻下冰晶形成太快破壞組織)
再一起放入小型液態氮桶中
如果有較詳細包埋的步驟也請好心的版友寄信給我可以嗎??
謝謝T___T
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 223.139.180.67
推
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