[討論]plasmid transfection 蛋白表現困境

看板Biotech (生命科學)作者 (keeny￾ ￾NN )時間13年前 (2012/06/01 01:02), 編輯推噓3(303)
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大家好 我最近利用lipofectamine2000轉一個tumor suppresspr sprouty2 plasmid(Flag-Tagged) 到melanoma cell lines(有suppressor表達但低表達) 困難:(1)我可以用western blot看到Flag,但當我用Sprouty2抗體時,Sprouty2量並沒增加 (2)Lipofectamin2000效果很好(我有GFP plasmid當control) (3)Sprouty2 plasmid transfection應該沒有問題,因為(A)有定序(B)有Flag (C)Sprouty2 transfection 造成大量下游pERK1/2被抑制這跟reference 一樣 (pcDNA3.1 vector control沒有pERK1/2抑制) 求救:為什麼我看不到Sprouty2增加 Thanks for help! -- oh my god!! 我又在枕頭上流口水啦!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 150.231.246.1

06/01 03:34, , 1F
抗體確定沒問題嗎?
06/01 03:34, 1F

06/01 08:54, , 2F
你確定你看到的是sprouty2?
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06/01 22:55, , 3F
是的. positive control works. 而且沒有non-specific band
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06/02 10:51, , 4F
你有看過S抗體認的位置嗎?如果其是認N端,而tag在C端
06/02 10:51, 4F

06/02 10:54, , 5F
且N端被切一小斷掉,這個會造成S蛋白的訊號沒有增加
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06/02 10:57, , 6F
所以在band size小的位置有訊號出現嗎?當片段更小時會看不到
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文章代碼(AID): #1FnwGzf2 (Biotech)
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