[求救] 大分子蛋白(ATM,350kd)SDS-PAGE &transfer
最近正在做 ATM(350kd) Western blot,由於是新手
最近試了幾次, 以5% resolving gel跑 60V,30min + 100V, 90min,
transfer完之後, 今天看結果, 發現根本沒有東西= =+
想請教有經驗的大家, 像ATM這種大蛋白
1.跑SDS-PAGE 該用多少% 的resolving gel? 以及電壓和時間的控制是多少為宜?
系統是 Mini-PROTEAN®Tetra Cell http://0rz.tw/8XCrB 厚度1.5mm
2.至於transfer的電壓/電流條件和時間約多少較適當?需要O/N嗎?
磷酸化的ATM 除了lysis時要另加 phosphatase inhibitor外還有其他要注意的嗎?
使用的是全濕式 Mini Trans-Blot®Cell http://0rz.tw/dVnGj
先謝謝大家的不吝指教, 感激不盡~^^
PS:補上抗體資訊
ATM: http://www.cellsignal.com/products/2873.html
p-ATM: http://www.cellsignal.com/products/4526.html
麻煩大家了 感激不盡 Orz
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