[求救] 我的PCR primer 是不是有問題
目前為了找出白蝦裡的血藍素
採了組織 抽了RNA 翻了cDNA
但到了我們要利用設計好的primer 去夾
卻始終夾不出來 連用梯度去跑 也沒東西
想請問看看 是我們的primer有問題 還是哪裡出了問題
這是白蝦的血藍素序列 cDNA 濃度則是4.9 ug/ul
http://ppt.cc/tvMU
而我們設計了兩組primer 加上切位 CCCGGG和CTGCAG
F-5'-AT CCC GGG G AAATGGGAATTTTCAGAATG-3'
R-5'-AT CTG CAG TGCATATGTTCTTTATTGTGG -3
F-5'-AT CCC GGG C ATGAAATGGGAATTTTCAGA -3
R-5'-AT CTG CAG AAACAATTCATTCATCGACA -3
配法
cDNA 1
PCR buffer 1
2.5 mM dNTP 1
1/5x 稀釋 Primers 0.2
Taq DNA polymerase 0.1
ddH_2O 6.7
total 10
這是我們的梯度PCR program
Stage1 Stage2(35cycles) Stage3
95℃ 94℃ 55~65℃ 72℃ 72℃ 4℃
5min 30 sec 1 min 2 min 10 min Hold
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.59.89.34
※ 編輯: jkq 來自: 210.59.89.34 (07/18 09:36)
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