[求救] 請教RNA 萃取達人

看板Biotech (生命科學)作者 (Goodday)時間13年前 (2012/07/23 15:50), 編輯推噓2(2013)
留言15則, 5人參與, 最新討論串1/1
發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 我在萃取裸鼠皮膚的RNA 但是遇到的問題是皮膚RNA degrade 得很嚴重 若是傷口皮膚則degrade 得更嚴重 據說formamide http://en.wikipedia.org/wiki/Formamide 可以穩定RNA 因此formamide 在RNA 電泳實驗中可做為Stabiliser 想請問的是.... 在使用Trizol 方法萃取RNA 後 在最後回溶的步驟 若用formamide 來回溶RNA 以期達到穩定RNA 的效果 formamide 是否會干擾後續RT 進行? 會問這問題是因為最近要做裸鼠皮膚傷害的microarray 但RNA degrade嚴重難以得到品質好的RNA 因此查到formamide 能穩定RNA... 感謝分享~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160

07/23 16:03, , 1F
想知道+1 但是如果後續要轉RT的話不知道會不會有影響
07/23 16:03, 1F

07/23 16:35, , 2F
RNAse inhibitor
07/23 16:35, 2F

07/23 17:59, , 3F
在回溶RNA 的溶液添加 RNAse inhibitor?
07/23 17:59, 3F

07/23 18:02, , 4F
還是直接用滅菌過的DEPC水效果就很好了?
07/23 18:02, 4F

07/23 19:00, , 5F
其實是我的老師要我用formamide 溶 但我懷疑RT 能做嗎...
07/23 19:00, 5F

07/23 21:40, , 6F
想想蛋白質碰到福馬林會怎樣,特別是RTase這麼敏感的酵素
07/23 21:40, 6F

07/23 23:33, , 7F
皮膚上有很多RNase 主要是它們造成RNA degrade
07/23 23:33, 7F

07/24 10:43, , 8F
formamide是甲醯胺 但我不知道formamide會不會對
07/24 10:43, 8F

07/24 10:43, , 9F
RNA 或 RT 造成甚麼影響
07/24 10:43, 9F

07/24 10:45, , 10F
R大之意是 意味萃取到最後步驟用甚麼溶就沒差了?
07/24 10:45, 10F

07/24 12:45, , 11F
從一開始萃取RNA時RNase就一直在作用了 試試看在第一步
07/24 12:45, 11F

07/24 12:46, , 12F
lyse的溶液就加inhibitor試試看
07/24 12:46, 12F

07/24 12:47, , 13F
然後操作盡量快 維持低溫 降低RNase的作用
07/24 12:47, 13F

07/24 12:49, , 14F
最後回溶的溶液是不用加inhibitor
07/24 12:49, 14F

07/24 21:08, , 15F
啊看錯了,抱歉XD
07/24 21:08, 15F
文章代碼(AID): #1G3G9NHD (Biotech)
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