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[求救] plasmid DNA & Western blot

看板Biotech (生命科學)作者 (向日葵大燦笑)時間13年前 (2012/07/31 15:36), 編輯推噓2(2推 0噓 6→)
留言8則, 3人參與, 最新討論串1/1
想請問大家 (1) 我用Genebank 的miniprep抽plasmid DNA 跑DNA膠看起來不純(多在我要的產物上方有雜band，8000-10000 bp)， 且OD260/280 都大於2 請問該如何改善? (2) 請問當western blot(16 % ) 壓片出來發現26 kDa以下的band都是糊的 (上面大分子band很sharp，看起來沒問題) 我覺得應該是跑膠時過熱導致，但不知道是running or transfer有問題， 請問該如何改善? (3) 跑SDS PAGE，定福特還是定電流會有差別嗎?哪一個條件比較好? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97
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07/31 18:12, , 1F
(1)那有可能是supercoil form的plasmid 下次確定酒精
07/31 18:12, 1F
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07/31 18:13, , 2F
都去除之後再elute看看OD值
07/31 18:13, 2F
→
07/31 18:13, , 3F
(2)試試看把整個tank放在碎冰裡呢?
07/31 18:13, 3F
推
07/31 21:25, , 4F
(1)可以跑膠之後將有目標DNA片段切膠再做一次elition
07/31 21:25, 4F
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07/31 21:31, , 5F
(2)蛋白質條帶擴散應增加電壓
07/31 21:31, 5F
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07/31 21:34, , 6F
(3)一般來說:15mA約10分鐘(過上層後),30mA約30~40分鐘
07/31 21:34, 6F
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07/31 21:35, , 7F
(3)但也有實驗室固定電壓
07/31 21:35, 7F
推
08/01 00:10, , 8F
你 miniprep 搖大大力了吧 才會有 gDNA 汙染
08/01 00:10, 8F
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