[求救] Real time PCR測試primer有問題！
最近第一次使用real time pcr test cdna
測試樣本前老闆要我先測試primer
就是以不同稀釋倍數（1/1,1/4,1/16...1/1024)的sample來看ct是否差2個cycle
結果出來，3重複間有的會差到兩個cycle，然後各稀釋濃度間的slope也不是2
（很多大於2)
老闆跟我說有可能是：
1.pipet有誤差
2.cdna裡面的inhibitor讓最高的濃度那管比較難p，所以slope才會大於2
建議我cdna先purify後再分裝成不同濃度再test
想請問大家除了這兩個原因之外還有什麼我應該要注意的？
第一次使用好多地方不是很懂
還有在pipetting上應該要注意的地方？
我是用abi 7300機器，kapa的sybr，都是先mix在別管裡面（這裡pipet應該沒問題吧？）
再一次將3重複加到96孔盤
希望大家給我一些意見，謝謝！！！
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