[求救] 抽E.coli的DNA

看板Biotech (生命科學)作者 (V)時間13年前 (2012/08/11 17:14), 編輯推噓1(108)
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最近做專題學長教我抽大腸桿菌的DNA 他叫我照著Kit的方法做 我們用的kit是GE healthcare bacteria genomicPrep Mini Spin Kit 剛剛用到第4步驟 加LysisBuffer4的時候 下面會有果凍狀的物質出現 裡面有白色棉絮狀物質 說明書說要將上清液移過去 可是都會吸到果凍 就把濾膜塞住了 他的步驟是寫離心後丟棄下層物質,但因為他是果凍狀根本用不下去 我就多離幾次還是沒有後我就加了下個步驟的Wash buffer 這步驟有成功過濾了,果凍狀物質消失,此時DNA應該是附著在濾膜上了 但是後來加入回溶溶液後,離心還是有一些液體在濾膜上方無法通過 在離心一次之後就只剩下些微了 但我拿回溶之後的液體,去測OD260 如果稀釋的話 吸光值是負值 如果不稀釋的話 吸光值約0.1~0.2 請問我這樣可能是哪裡有問題了呢? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 111.254.230.63 ※ 編輯: preprice 來自: 111.254.224.139 (08/11 20:30) ※ 編輯: preprice 來自: 111.254.224.139 (08/11 21:08)

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buffer4加入後,室溫作用5min,離心1000g,再室溫5mins
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請問是1000g還是沒辦法把上清液分離出來嗎??
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我是離心10分鐘 12000g 直接用倒的XD
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挖哩 你 wash buffer裡有水 DNA當然就回溶衝走了阿....
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你離心轉速多大
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上清液還可以 用抽的會抽到一點果凍 用到的就全進去了
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離心速度是11000g
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※ 編輯: preprice 來自: 111.254.224.139 (08/11 23:37)

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照這樣描述的感覺是反應不完全
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08/12 21:50, , 9F
菌量用多少啊??
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文章代碼(AID): #1G9Y9iNS (Biotech)
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