[求救] 從活體器官純化GST
取的器官是肝
均質化後溶於phosphate buffer (25ml, 10mM, pH7.0)
Sonication on ice for 2min ,then centrifuged at 4ﾟC and 9000 rpm for 25min.
Supernatant 經過Filter後
用glutathione-Sepharose 4B binding 30min
用phosphate buffer (10ml, 10mM, pH7.0) 洗
接著用phosphate buffer(30ml, 20mM, pH7.0), containing NaCl (150mM)
最後用Tris-Cl buffer (5ml, 50mM, pH8.0), containing GSH(10mM) 去做Elution
的動作
最後在用Gel-filtration (S-100 column
但是最後跑膠後 在接近的位置有兩條band
目前判斷是有兩種protein (其一應該是GST
不曉得這樣的步驟是否有問題@@
因為主要是想但純得到GST
謝謝大家指教
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推
07/24 16:12,
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07/24 16:15,
07/24 16:15
推
07/24 16:16,
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