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[求救] 小鼠眼球冷凍切片

看板Biotech (生命科學)作者 (昂 布拉股)時間13年前 (2012/10/12 23:40), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 4人參與, 最新討論串1/1
板上各位先進大家好 最近在做小鼠眼球的冷凍切片 主要目的是觀察水晶體 但是切片時 水晶體一直會皺縮成一團掉下來 私以為可能問題出在固定包埋的過程 因為眼球本身含水量就很多 以下列出我大概的處理步驟 希望有經驗的朋友可以給點建議 感謝!! 1.取下眼球 先以PBS浸洗過後 放在4% paraformaldehyde 固定overnight 4度C 2.隔天進行蔗糖序列脫水 5% sucrose in PBS 1h 10% sucrose in PBS 1h 30% sucrose in PBS O/N 3.浸泡1:1/30% sucrose:30% OCT in PBS 3h 4.OCT包埋 切片 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 124.218.68.208
推
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lens 感覺就超難切的!!!!!!!!
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不知道 你冷切有成功切出完整的過嗎?
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我是整顆眼球脫水後石蠟包埋 粗切後泡冰塊水4度c
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至少六小時 讓LENS軟一點後切有時可以切出完整的lens
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但我只要是看cornea 所以lens完整性沒有很注意觀察
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但切5mm 可以看出整顆眼球中間有一塊透明薄膜
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他是可以切下來 可是都會皺掉
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lens本身周圍水就很多 如果沒有其他組織撐著他
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很容易len自己就先捲起來
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如果只看Cornea的話 眼球取下直接丟OCT包埋 Cornea其
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還蠻完整的 不像lens這麼麻煩
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推
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我之前是不脫水直接切 會有完整的lens
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推
10/14 21:42, , 13F
我記得軟組織的冷凍切片,溫度是不是要調高一點,然後切厚點?
10/14 21:42, 13F
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