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[求救] beta-actin 有兩條

看板Biotech (生命科學)作者 (menemo)時間13年前 (2012/10/24 18:35), 編輯推噓6(6推 0噓 6→)
留言12則, 7人參與, 最新討論串1/1
最近開始做western blot 發現壓出來的beta-actin都是兩條 之前還有過第一次壓出來是一條 隔天同樣sample拿出來在跑一次電泳又變成兩條 http://ppt.cc/Vxh~ 上面是第一次壓出來的 下面的是重新跑過電泳壓出來的 用PVDF膜 使用Millipore的beta-actin 一抗為1:400000 室溫下兩小時 二抗為1:20000 室溫下一小時 實驗室學姊也是過同樣方法 從來沒這個問題 推測問題可能是在sample本身（細胞）或者是自己實驗手法 不知道有沒有人也有過這樣的困擾？ 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.67.123
推
10/24 19:44, , 1F
sample denatured 有不同?
10/24 19:44, 1F
推
10/24 23:03, , 2F
10/24 23:03, 2F
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10/25 11:36, , 3F
你的一抗稀釋倍率這麼高喔？ 抗體 reused 後曾有過類似問題。
10/25 11:36, 3F
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10/25 22:55, , 4F
SAMPLE BUFFER是原本已經配好 要跑電泳前拿出來用
10/25 22:55, 4F
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10/25 22:56, , 5F
可能就差在煮的時間不一樣 但是大概都控制在6~8分鐘
10/25 22:56, 5F
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10/25 22:57, , 6F
dye的問題我也想過 可是學姊也都用同一罐 偏偏她的就正常
10/25 22:57, 6F
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10/25 22:59, , 7F
這隻beta-actin蠻強的 所以才稀釋這麼多
10/25 22:59, 7F
推
10/26 10:49, , 8F
你壓片時間多少?
10/26 10:49, 8F
推
10/26 23:04, , 9F
這隻抗體超強,我們2萬倍只需要呈色3秒
10/26 23:04, 9F
推
10/26 23:27, , 10F
謝謝推薦@w@一隻好抗體能撐好久 XD~~
10/26 23:27, 10F
推
10/31 12:36, , 11F
謝謝推薦。
10/31 12:36, 11F
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10/31 21:44, , 12F
我要壓個30秒才會有影像出來～
10/31 21:44, 12F
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