PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[問題]關於蛋白純化

看板Biotech (生命科學)作者 (史前巨熊)時間13年前 (2012/11/01 13:05), 編輯推噓0(0推 0噓 7→)
留言7則, 2人參與, 最新討論串1/1
最近剛好在純化蛋白 實驗室的protocol是 利用nickel column先做初步的純化 再使用gel filtration做第二步的純化 第一個問題是 第二步的gel filtration會不會使sample"流失"很多? 第二個問題是 爬文有看到說利用TALON抓His-taq,可獲得純度較高的Protein. 那是否就無需再做gel filtration? 第三個問題是 nickel純化完的雜band是否與表現系統有關? 原Po目前使用的是insect cell expression,gel filtration後可以看到其他的peak 而使用E coli expression,gel filtration只有單一的peak 謝謝大家的指導 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.65.186
→
11/01 13:36, , 1F
1. 看你的GF column大小，愈大體積會損失愈多
11/01 13:36, 1F
→
11/01 13:37, , 2F
GF完後濃度也會被稀釋掉，如果需要濃度高點，可能還得濃縮
11/01 13:37, 2F
→
11/01 13:38, , 3F
2. 作GF除了移除雜質，還有aggregate，端看你實驗的要求
11/01 13:38, 3F
→
11/01 13:39, , 4F
3. 跟表現系統有關，也和純化wash的方法有關
11/01 13:39, 4F
→
11/01 13:39, , 5F
表現系統可能會有非專一性的吸附產生雜質
11/01 13:39, 5F
→
11/01 13:40, , 6F
適當的wash可以減少非專一性的吸附，達到降低雜質的結果
11/01 13:40, 6F
→
11/01 15:48, , 7F
可以說純度跟產量是成反比？
11/01 15:48, 7F
‣ 更多 ohyeh1021 的文章
文章代碼(AID): #1GaWCFfM (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 ohyeh1021 的文章
文章代碼(AID): #1GaWCFfM (Biotech)