[求救] Luciferase assay system

看板Biotech (生命科學)作者 (rickkao11)時間13年前 (2012/11/26 11:48), 編輯推噓2(2016)
留言18則, 8人參與, 最新討論串1/1
想請問一下大家關於luciferase internal control的問題 目前是用promega的dual系統,pGL3 cotransfection with pRL-TK 可是一直怪怪的, 老師就想去查查看如果改用GFP當control是否可行 之前版上似乎有人這樣做過,不過並沒有回應 想請問一下如果cotransfection GFP和 pGL3的話 在測光的時候是否有影響 (雖然就原理上一個是冷光一個是螢光應該不會有影響 可是還是想問問看有沒有人做過) 另外想請問一下最近有業務在推Pierce luciferase dual system 那時問的價錢有差,而且似乎不用像promega加兩種試劑 老師還蠻有興趣的 想請問有沒有人用過,用起來怎麼樣? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.121.97

11/26 11:53, , 1F
不要鬧了..
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11/26 12:34, , 2F
不好意思可以請問一下是為什麼嗎?
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11/26 12:50, , 3F
你們有機器可以讀各種波長的冷光,甚至還能激發螢光嗎?
11/26 12:50, 3F

11/26 13:14, , 4F
老師是打算要用GFP的抗體壓western,是怕說測冷光時會
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11/26 13:14, , 5F
不會影響
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11/26 13:21, , 6F
另外是有考慮trysin下來的細胞分兩堆,一堆做luciferase
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11/26 13:22, , 7F
一堆拿去測Flow,不過主要的問題是在於說測冷光時,gGPP
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11/26 13:23, , 8F
會不會影響到Luciferase的值
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11/26 14:22, , 9F
既然GFP要用WB壓,不如像以前送pSV-b-gal好了,reader就可測
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11/26 16:20, , 10F
gfp不可能影響,發光機制根本不同
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11/26 16:21, , 11F
dual reporter很貴但是定量上比較嚴謹。
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11/26 16:22, , 12F
用gfp當control是因為不想買coeleterazine?
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11/26 18:58, , 13F
不會影響啦....
11/26 18:58, 13F

11/26 19:45, , 14F
我以前用Beta gal 同時也有送含GFP的plasmid
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11/26 19:46, , 15F
測的是luciferase 也是Promega 沒問題阿
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11/26 21:38, , 16F
實驗室有人做過,沒問題
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01/05 15:06, , 17F
一個要激發光源,一個部用;一個不需reagents,一個要
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另外,跑western時,luciferase應該以denature (SDS-PAGE)
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文章代碼(AID): #1GikQL54 (Biotech)
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