[求救] active caspase-6 偵測

看板Biotech (生命科學)作者 (人生就像個不可逆反應)時間13年前 (2013/01/05 20:50), 編輯推噓3(304)
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各位版友好, 想請問一下有沒有人用過 cell signaling他們家的cleaved caspase-6 (#9761) http://tinyurl.com/b76yf56,先前實驗發現我的蛋白質(可能是caspase-6的受質), 有被切的現象,而大小也正好事caspase-6的切位。因此想直接壓cleaved caspase-6 的訊號。但在十幾kD的位子沒看到我預期的訊號,且backgroud頗髒。 我的實驗步驟如下: 1、實驗的sample (原濃度為1 ug/ul)利用蛋白質沉澱方式濃縮三倍(理論濃度為3 ug/ul) 2、每個lane loading 60 ug的蛋白質。 3、跑12%的gel。 4、Blocking with 3% BSA 1小時。 5、Cleaved caspase-6 (1:1000) O/N. 6、Anti-rabbit (1:2000) 1小時。 請問有什麼地方可以改進的嗎…? 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.237.129

01/05 22:17, , 1F
可先照data sheet的步驟 用牛奶blocking和下抗體減少雜訊
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01/05 22:18, , 2F
因為有時牛奶blocking效果比BSA好
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01/05 22:28, , 3F
找個postive control一起試試吧 說不定caspase-6沒被切
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01/06 13:53, , 4F
二抗會不太濃了? 照片如果有, 可以po看看.
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01/06 20:09, , 5F
有目標蛋白但背景髒可以先試5%milk blocking 如果目標沒
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有消失但背景還是不乾淨 再試5%牛奶+1%BSA(這招很強大)
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01/06 21:58, , 7F
試這一類帶有某些activity意涵的Ab沒有比較postive實在不推
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文章代碼(AID): #1Gw269Z7 (Biotech)
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