[求救] 大分子量的蛋白做westen blot的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (Daphnia)時間13年前 (2013/01/16 22:41), 編輯推噓6(6021)
留言27則, 9人參與, 最新討論串1/1
做大分子量蛋白的westen blot(MUC2 ABcam的ab11179吧,抗體說明書是寫認600 kda) 該用幾%的膠去跑阿???我跑出來抗體認出來的位置怪怪在170 kDa,我用的marker最大 也只到170 kDa(不知是不是抗體專一性不好)還是我的目標根本沒壓到卡在很上面的地方 有沒有做過那麼大分子量的神人指導我一下 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 121.254.66.200

01/16 23:42, , 1F
做IF啦~做什麼WB
01/16 23:42, 1F

01/17 00:12, , 2F
沒設備配合啊…實驗室沒這技術要重新建立有難度!
01/17 00:12, 2F

01/17 00:54, , 3F
可能有神人做過,但如果你有列出條件與秀data更好,說不定不
01/17 00:54, 3F

01/17 00:56, , 4F
是%的問題,另外這支Ab clone有至少五家公司賣,有賣的都只有
01/17 00:56, 4F

01/17 00:57, , 5F
放IHC,WB可能有挑戰性,還有abcam沒放圖,美金賣價還偏貴
01/17 00:57, 5F

01/17 03:38, , 6F
1樓..IF和WB可以看的事情不太一樣吧~
01/17 03:38, 6F

01/17 09:06, , 7F
600...如果是要定量的話我覺得改用flow會好一點
01/17 09:06, 7F

01/17 09:07, , 8F
wb跑600用3%還可能卡在well上吧一.一
01/17 09:07, 8F

01/17 10:25, , 9F
agarose如何?
01/17 10:25, 9F

01/17 10:52, , 10F
01/17 10:52, 10F

01/17 10:55, , 11F
貼失敗.....http://ppt.cc/a3~w應該OK了
01/17 10:55, 11F

01/17 10:59, , 12F
最右邊有白色的兩條BAND從上到下是170和130的marker
01/17 10:59, 12F

01/17 11:00, , 13F
WB真的可以跑那麼大分子量的蛋白嗎???
01/17 11:00, 13F

01/17 14:16, , 14F

01/17 15:40, , 15F
這網站感覺不錯!!感謝,我來研究看看說不定找出我的盲點
01/17 15:40, 15F

01/17 20:04, , 16F
http://ppt.cc/ZcO8 看一下Q2,有Western blot的條件
01/17 20:04, 16F

01/18 13:34, , 17F
你的abcam產品序號寫錯了吧
01/18 13:34, 17F

01/18 22:19, , 18F
600KDa...慘痛的回憶
01/18 22:19, 18F

01/18 22:22, , 19F
當然有人跑過這麼大的 就是有人成功 當初我老闆才會要我作
01/18 22:22, 19F

01/18 22:24, , 20F
我用過3%以及4%~20%的膠很難跑...
01/18 22:24, 20F

01/18 22:26, , 21F
transfer也是很大的問題...以前隔壁神人老奶奶作過破千的
01/18 22:26, 21F

01/18 22:27, , 22F
他的gel是agarose,transfer的方式有點像南方墨點法...
01/18 22:27, 22F

01/18 22:28, , 23F
實驗室若沒有相關的經驗...可能會遇到不少困難
01/18 22:28, 23F

01/18 22:29, , 24F
不過要是妳成功了 可以跟大家分享一下心得嗎
01/18 22:29, 24F

01/20 23:26, , 25F
嘆~還在胡亂做測試……頭非常痛!
01/20 23:26, 25F

01/20 23:28, , 26F
真的有可能做的出來嗎???我想準時畢業啦!!!
01/20 23:28, 26F

01/20 23:30, , 27F
真的也我產品序號記錯了……是ab11197才對
01/20 23:30, 27F
文章代碼(AID): #1GzhmlCT (Biotech)
文章代碼(AID): #1GzhmlCT (Biotech)