[求救]transfection後,從dish分離出單一細胞株?

看板Biotech (生命科學)作者 (肚子餓了)時間13年前 (2013/01/24 16:20), 編輯推噓4(404)
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各位前輩大家好~~ 最近在做 stable transfection, 大部分的研究通常會挑數個細胞群落來做實驗, 因為每個細胞吃進去的vector數量可能不同,target protein表現量也不相同, 但是我一直有個疑問… 利用抗生素篩選過後dish中有數顆細胞存活下來, 當細胞數目增殖到一定數量的時候,要進行subculture的動作, 可是…要如何分離出單一的細胞群落?? 如果要用trypsin把細胞打下來的話,要怎麼樣才能把同一dish上, 不同的細胞群落分別打下來呢~? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.133.83

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google cell cylinder
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用tip挑也可以
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把濾紙剪小塊後滅菌~沾trypsin用黏的也可以~
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用篩選的抗生素濃度分兩組,一組是原來的濃度
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一組濃度 1.2~1.5 倍。subculture 最少 1:1000 稀釋
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這樣兩種抗生素濃度就有 20 盤。一個禮拜後用 tip 直接挑
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subculture 每種抗生素濃度分 10 盤
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subculture 時不要心軟,要大量稀釋,不然很容易重做
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文章代碼(AID): #1H0EwmRg (Biotech)
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