PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] PCR位置不對

看板Biotech (生命科學)作者 (玩具)時間13年前 (2013/03/06 09:06), 編輯推噓1(1推 0噓 5→)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/1
請問各位大大 最近在做ligation insert 1k vector 7.3k transformation後 有長一顆 就直接抽plasmid 之後拿plasmid 去PCR 發現 用vector上的primer夾出來比預計多500bp左右 但用當初夾insert的primer 又夾的出來 拿去做RE剪切 位置又高出500bp左右 切位用BamHI PstI 想請問 如果這plasmid是錯的 為什麼也能夾出insert 請各位高手賜教了 如需要什麼資訊 小弟再提出 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.205.158.77
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03/06 11:47, , 1F
primer不夠專一 insert內容應該是錯的 訂個序就會知道了
03/06 11:47, 1F
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03/06 11:49, , 2F
再不然就是ligation的時候除了1k的insert不也塞了其他東西
03/06 11:49, 2F
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03/06 11:51, , 3F
還有就是...你確定vector上的primer跟切位是緊鄰insert的?
03/06 11:51, 3F
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03/06 13:11, , 4F
不是緊連著 我有算過 比預計多五百
03/06 13:11, 4F
推
03/07 10:49, , 5F
送定序不就有答案了嗎? 1K也沒多少錢
03/07 10:49, 5F
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03/07 11:51, , 6F
小弟我今天要送了 謝謝各位
03/07 11:51, 6F
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