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[求救] Trizol抽RNA~

看板Biotech (生命科學)作者 (因禍得福???)時間12年前 (2013/04/01 18:04), 編輯推噓2(2推 0噓 11→)
留言13則, 7人參與, 最新討論串1/1
想請問各位前輩 使用Trizol抽"植物"RNA時 在Agaross gel 上 28s:18s rRNA的比例有辦法到1.8~2.0嗎? 最近在做real-time PCR,但是biological repeat間的error bar很大 再想是否與RNA的品質有關 文獻上說rRNA的比例要到1.8~2.0 可是我們實驗室抽出來都只有1 >"< ......我們老師說磨的時候用力一點.....就會抽得比較好..... 可是我很懷疑啊~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 133.50.190.84
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04/01 18:27, , 1F
RNA超容易degrade 也許有關~
04/01 18:27, 1F
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04/01 18:30, , 2F
是指QC的ratio嗎？那個有時候跟物種有關
04/01 18:30, 2F
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04/01 18:31, , 3F
磨得細應該是回收量比較大吧..個人認為只要有磨還是可以抽
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04/01 21:32, , 4F
磨到很細有用喔!以前Lab也碰過類似的問題
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04/01 21:55, , 5F
我會再用DNASE I處理~然後用PHENOL-CHLOROFORM萃一遍
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04/02 11:21, , 6F
有做DNase處理跟再萃取，以吸光值來看是沒有問題>"<但是就
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04/02 11:24, , 7F
好像被分解掉了~那磨sample是on ice嗎?ambion的protocol是
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04/02 11:25, , 8F
常溫磨，我有點不太理解...這步會有很嚴重的影響嗎?
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04/02 13:23, , 9F
我習慣加液氮磨耶
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04/02 13:24, , 10F
你有gel圖可以讓大家看看嗎？
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推
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液態氮磨 +1
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推
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你之後有用phenol/chloroform 嗎?
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05/01 02:13, , 13F
記得離心後不要吸到下層的有機層，祝順利
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