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[求救] 請問plasmid cotransfection的問題?

看板Biotech (生命科學)作者 (ilovesuju)時間12年前 (2013/04/15 00:31), 編輯推噓2(2推 0噓 10→)
留言12則, 5人參與, 最新討論串1/1
想請問各位是否遇過類似的問題， 我將兩個等量的plasmid同時利用lipofectime2000 transfect到HEK293細胞中 但是每次都是某個plasmid的表現量很低 有時候甚至沒有表現 一開始我懷疑是不是plasmid有問題 所以重新做了maxi prep 也送了定序 都是ok的 想請各位有遇過類似的問題嗎? 或者可以給我一點建議呢? 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 95.117.122.145 ※ 編輯: cdkcyclin 來自: 95.117.122.145 (04/15 00:32)
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04/15 02:39, , 1F
single transfec應該是正常的吧,為什麼會懷疑sequence有錯?
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04/15 02:41, , 2F
如果是因為single transfec表現量就不正常,那標題明顯誤導
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04/15 02:46, , 3F
一般來說cotransfec有干擾很常見,連plasmid跟si一起放也會
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推
04/15 17:26, , 4F
正常 干擾也有可能是表現的競爭
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04/15 17:26, , 5F
看你的實驗目的是什麼 有時候量不同沒關係 有時候有
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04/15 20:17, , 6F
會耶 我送兩個plasmid也常常遇到一個很強另一個很弱的
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04/15 20:17, , 7F
如果兩個plasmid用不同promoter會好一點嗎?
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04/16 09:45, , 8F
會，用同一個就變成競爭啦
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04/16 12:27, , 9F
但是這樣一口氣要改24個plasmid...想到就懶
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最神奇的是我的control不管怎麼表現 兩個plasmid的表現量
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一直都很穩定 只有實驗組會有表現不平均的情形
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推
04/16 19:14, , 12F
藥會影響protein stability?
04/16 19:14, 12F
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