[求救] 請教comet assay相關問題

看板Biotech (生命科學)作者 (蒼之濤)時間12年前 (2013/04/17 11:39), 編輯推噓0(006)
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各位好: 這是我第一次做 comet assay 我們家有買 TREVIGEN 的 kit 所以分別有做了 Alkline/Neutrl 二種 有按照他們家的 protocol 做 但我們家沒有專門跑 comet assay 的電泳槽 只能用一般跑gel的電泳槽跑 請問: (1) 跑gel的條件是使用1x TBE, 18 V/cm,跑30分鐘 [利用外接電源供應器(MP-250V),1 V/cm,電泳槽 - → + 為18cm] 但是電流就沒像說明書上達到~220mA 這樣跑出來的是沒問題的嗎? 還是需要借專門跑comet assay的電泳槽? (2) 請問利用這套kit做需要用蓋玻片壓嗎?(一開始將膠滴在玻片上的時候) 而且最後在37度烘箱烘乾之後,需要再做額外的處理嗎? 需要再加mounting medium在封起來嗎? 因為利用螢光顯微鏡拍照的時候很常對不到焦 請問有什麼解決的方法嗎? 請有做過的大大指導一下 感恩^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.66.102

04/17 13:25, , 1F
一般電泳槽即可,可是我看到的常見的是14cm,你的還有點大
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04/17 13:27, , 2F
這個kit不需蓋玻片,買來的已經coating好了,還有,別用37度
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04/17 13:28, , 3F
比較好,泡EtOH後直接放有機hood烘一下很快就乾
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04/17 13:31, , 4F
也不用封片,對焦不到是因為gel還是有其厚度,其中包覆cell
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04/17 13:33, , 5F
所以無法在同一層,一開始放的agarose量減少比較能解決問題
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04/18 10:12, , 6F
謝謝樓上大大的幫忙^^ 最近來試一下減少agarose的條件
04/18 10:12, 6F
文章代碼(AID): #1HRXbqh2 (Biotech)
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