[求救] transfection的步驟

看板Biotech (生命科學)作者 (kat)時間12年前 (2013/04/17 13:56), 編輯推噓1(1011)
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現在用的是santa cruz的transfection reagent和transfection medium 要用的是siRNA的系統 看到santa cruz的protocol有寫到 1.要用 antibiotic free的medium~ 所以是真的不能在growth medium中加任何antibiotic嗎? 因為我家的細胞中都有加antibiotic可以直接將細胞從有antibiotic的換到沒有的嗎? 2.在transfection前,他說要用transfection medium wash過,這個步驟是有必要的嗎? 因為在transfection 過後是直接加入transtection medium+reagent+siRNA incubate 5-7hr 所以~是要照protocol寫的照做? (因為有看到說transfection前最好不要換medium) 3.這樣的做法好像是transient transfection,他是可以打下來再換到我要做實驗條件嗎? 因為第一次做,所以有以上問題想請教大家~謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.60.122.160

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1. 可以直接換沒問題. 事實上,養細胞不需要加antibiotic
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2. transfection medium通常是serum free,因此wash可將原
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本的serum洗去,建議照protocol做~
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lipo2000,fugene hd, turbofect等不少家都不需要serum free
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serum free效率比較高啦
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沒用過santa cruz但是lipo2000就很好用了
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Fugene HD前幾年QC不穩 後來換掉 Turbofect的毒性有點科科
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如果要送大量plasmid要用到大量transfection reagent的時候
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要考慮一下 現在都用TransIT 2020 超好用!
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lipo2000我都是用來送RNA(>10K)
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siRNA你送進去應該過幾天就失效了吧?
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除非你送得是shRNA可以用抗生素篩選有帶plasmid的細胞
04/18 13:50, 12F
文章代碼(AID): #1HRZc2Wg (Biotech)
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