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[求救] loading dye擋住我的band

看板Biotech (生命科學)作者 (治玉)時間12年前 (2013/04/18 01:57), 編輯推噓3(3推 0噓 20→)
留言23則, 9人參與, 最新討論串1/1
我的實驗用一組八對primer來做multiplex PCR 其實只是在QC sample quality 但我每次做都覺得loading dye的光影(~200-500bp)遮住我的bands(有兩三個在這範圍) (一般來講不至於看不到,但總是有想要看清楚一點的時候...) 不知道有沒有那種沒有可見光顏色跑得特別快或慢或是沒有可見光的loading dye 可以讓我有清楚的8個band...OA 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.231.133.253
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你可以使用Invitrogen的黃色的dye
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那一組dye下面那一條(黃色) 會跑得比100bp還快
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你可以只加甘油......
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推
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可以試試 orange G，大約 ~50bp 位置
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所以這是不能退染的囉 / \
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其實你應該是跑太久 500bp位置的EtBR往上跑 跟上面還帶有
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EtBR的Gel上的band一比 自然覺得暗淡許多
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我會建議你先用外染EtBR 15分鐘 再退染個10分鐘
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這樣照起來你的band就會很漂亮惹
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我猜不是樓上說的那樣,他應該是藍紫兩色太濃蓋到
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200~500沒有理由跑很久,反而multi很可能用附贈的dye會很濃
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200~500還可以分出來有2~3個 band 總共有8個band 你覺得呢?
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我猜原po內染,而且用commercial dye不是自己配的
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自己配可以調顏色濃淡,不過orange G比較好,真的不會蓋到
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我猜原po外染....
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如果你真的想有 dye 又不想顏色太重，就用水和甘油稀釋
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dye
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推
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http://ppt.cc/SWWk 改變一下膠的濃度也能解決
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推
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1%的膠 bromophenol blue大概就你說的那位置
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2%的膠 Bromophenol blue 大概在100bp的位置
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我確實是被藍色蓋住的...我們的imager藍色那區就是光圈.
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不過加甘油稀釋應該是一定可以做的
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