[求救] RE digestion
各位前輩好
最近在cloning的時候出現很詭異的問題
我所使用的是pEGFP-C3的plasmid
因為實驗需求
須把EGFP部分以AgeI跟BglII切下
然後用klenow切平在self-ligation
但是詭異的事情出現了
我用酵素作用完跑膠然後把上面的Band切下做klenow(此時確定EGFP的band有切出來,
有看到清楚EGFP的band)
然後self-ligation, transformation, mini-culture後
想說用ApaLI跟EcoRI確認一下，去掉EGFP之後應該會得到一個約1Kb的band
沒想到竟然出現1.7K左右的Band
這不就是EGFP又長出來了ㄚㄚㄚㄚㄚ
至此實在是百思不得其解....
有沒有哪位前輩有這樣的經驗可以指點一下!!
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