[求救] 利用螢光顯微鏡看phagocytosis?

看板Biotech (生命科學)作者cockroachian (恍惚人)時間12年前 (2013/05/26 23:41)推噓1(1推 0噓 0→)

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各位學長姊大家好小弟最近正在試著用螢光顯微鏡去觀察吞噬細胞對一個帶有螢光bead是否可產生吞噬? 但是一直不太順我的protocol大致如下 1.將細胞以LPS進行刺激 1hr 2.用PBS Wash 1次 3.將細胞加入FITC-bead(Cell:bead=10:1)進行吞噬反應一小時 4.利用PBS Wash 2次後進行cytospin後直接上螢光顯微鏡觀察這個protocol的幾個問題點 1.我進行吞噬的細胞主要有兩種一種是懸浮性的細胞另一種是半貼附的細胞試問半貼附的細胞在做wash後需以trypsin打下來嗎? 還是單純用medium沖刷下來就好? 2.做完cytospin後細胞被離心到玻片上是否還是須加蓋一層固定液再上去觀察怕細胞乾掉但又怕加下去就把細胞沖散 3.在可見光觀察細胞以及綠螢光觀察bead情形兩張圖片merge後 bead和細胞重疊是否不能代表細胞一定對bead進行吞噬? (也可能只是表現在膜上?) 所以是否需再利用一個cytosolic的螢光marker或是帶螢光的 cytoskeleton去染細胞再觀察cytosolic marker的圖和bead螢光是否能重疊? 麻煩大家指導一下小弟看protocol可再如何修改會較為完善謝謝大家！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 112.105.139.191