[求救] IP總是出現non-specific band
各位板友好，
我的實驗是想透過IP研究蛋白質A和N在腦瘤細胞中是否有直接的interaction。
我將V5-A和Flag-N的plasmid，同時transfect到細胞中，之後就可以利用V5或是Flag抗體
來pull down (control組用mIgG)。跑完WB之後，用V5與Flag抗體來偵測所抓下來的蛋白
質。
可是我現在遇到一個問題了。在我的IgG組，總是會偵測到一個non-specific band， 而
且這個band的位置，正好與Flag-N的大小幾乎一樣(大約110kD)。
為什麼我會知道那是non-specific band，而不是Flag-N。因為我之前做了一個簡單的測
試，我只transfect V5-A (沒有Flag-N)，然後用IgG與V5抗體去pull down。之後我將跑
完的膠，還是用Flag抗體來hybridize，結果在同樣的位置也出現這條band。
我附上我做的測試實驗，這樣子應該會更清楚。
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=hahaha93&b=1&f=1050765560&p=0
希望如果有對IP很有經驗的版友們，可以給我一些建議，
或是有人願意跟我討論實驗就太好了，多謝大家了。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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