[求救] Plasmid DNA回溶方法?

看板Biotech (生命科學)作者 (j31yo20)時間12年前 (2013/06/09 04:38), 編輯推噓2(2017)
留言19則, 6人參與, 最新討論串1/1
各位先進版友大家好! 小弟最近在做recombinat DNA,在少量萃取plasmid DNA時,跑出來的電泳圖有點奇怪 ,我懷疑是回溶時的問題,想請教各位回溶plasmid DNA時,都是怎麼回溶的? 以下是我萃取plasmid DNA的作法: 我會分別養兩種菌(分別包含不同的plasmid),之後將1cc的菌液放入eppendorf中,離心 ,之後加入solution I II III等步驟,加入95酒精後,plasmid DNA析出,再 將有plasmid DNA的eppendorf 倒置於架上,且放置室溫,將其plasmid DNA乾燥。乾燥? 使用ddH2O或者是TE buffer回溶。這裡就是我的問題: plasmid DNA是每一管eppendorf 都有,所以我不曉得要用多少體積的ddH2O或TE buffer回溶(每一管eppendorf)? ps. 一種plasmid都差不多有六管eppendorf,所以我該將六管中的plasmid全部用30ul 的體積回溶,還是我每一管都用30ul的體積回溶,這樣就有180ul的體積,會不會使DNA 濃度很低呢? 謝謝大家的指導~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 58.114.164.123

06/09 05:26, , 1F
六管一樣的plasmid為什麼不放在15mL離心管收在一起就好了?
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06/09 05:27, , 2F
之後用大約250ul 的soln I重新懸浮到一管eppendorf裡
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最後用30-50uL的二次水回溶即可 (就是你說的total 30uL)
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06/09 05:30, , 4F
ps 風乾那一步我會正立eppendorf上面覆擦手紙
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06/09 05:31, , 5F
避免整塊plasmid掉下來:( 趕時間放65度乾浴5分鐘 覆擦手紙
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06/09 05:41, , 6F
文章從頭到尾看不出電泳圖哪裡奇怪(說不定並非你所認為的)
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06/09 05:44, , 7F
如果你只聚焦回溶這件事,越多管操作,最後流失越多阿
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06/09 12:43, , 8F
因為我之前的回溶方式,回溶完會呈現黏稠狀
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06/09 12:45, , 9F
假設我total要回溶到30ul,我就會平分六管,一管5ul回溶
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06/09 12:46, , 10F
我是覺得我用太少的體積去回溶,pipeting會刮到DNA
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06/09 13:25, , 11F
文章還是沒有提到怎樣奇怪阿
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06/09 13:26, , 12F
至於文章提到擔心DNA濃度低,推文說怕黏稠,都不如直說OD濃度
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06/09 22:34, , 13F
原PO完全沒有提到電泳圖是怎樣個奇怪法阿..
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06/10 16:55, , 14F
50ul加到第1管 溶完再吸起來加到第2管...
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06/10 18:02, , 15F
每一管都用30ul回溶即可,濃度不會低的,太低也不會是體積
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的問題,比較可能是養菌的問題~
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06/10 22:15, , 17F
因為手邊沒有圖可以上傳,各位抱歉,很謝謝大家的建議~
06/10 22:15, 17F

06/10 22:37, , 18F
整篇回應讓我聯想到先前文章;問說手上某個蛋白的抗體不好用
06/10 22:37, 18F

06/10 22:38, , 19F
想知道誰有更好的抗體,可是卻沒提自己用哪一牌?怎麼不好用?
06/10 22:38, 19F
文章代碼(AID): #1HivPEg3 (Biotech)
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