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[求救] qPCR的NTC一直有東西

看板Biotech (生命科學)作者 (RussianDoll)時間12年前 (2013/06/21 11:38), 編輯推噓5(5推 0噓 17→)
留言22則, 7人參與, 最新討論串1/1
大家好 最近同學做的qPCR一直不成功 她遇到的問題是 NTC和sample的melting curve peak都會出現在同一個位置 一開始覺得是水汙染，重作之後還是一樣的結果 最後連sample和primer都重新稀釋再做也是一樣結果 請問primer dimer會讓NTC跑出東西嗎? 除了以上的可能性 還有甚麼原因會導致這樣的結果? 謝謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.136.180.95
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06/21 11:50, , 1F
可做一組不放primer的看看 primer dimer也會變出ds啊
06/21 11:50, 1F
推
06/21 11:54, , 2F
我覺得可能是primer汙染到template
06/21 11:54, 2F
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06/21 11:56, , 3F
原po說primer有從stock重新稀釋了@@
06/21 11:56, 3F
推
06/21 12:48, , 4F
如果sample和NTC的peak是同一個位置 應該是同一個產物
06/21 12:48, 4F
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06/21 12:49, , 5F
stock也有可能會汙染阿@ @a 我有認識的就是這樣
06/21 12:49, 5F
推
06/21 14:39, , 6F
喔 把pipetman拿去清一清 裡面被汙染了
06/21 14:39, 6F
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06/21 14:40, , 7F
這蠻常發生的 以前有聽過有人做northern 做到最後才發現
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06/21 14:40, , 8F
PCR出來的probe是別種東西 汙染源就是pipetman
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06/21 14:41, , 9F
你們如果很常做某個基因 比如說你抽1mg的maxiprep
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06/21 14:41, , 10F
到桌上 手套上 pipetman裡面 可能都有 ng~pg的 DNA殘留
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06/21 14:44, , 11F
*那麼
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還有用簡稱以前要先用全名講一遍 不然誰看得懂阿..
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殘留的DNA對別的實驗可能沒有影響 或者影響不大
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但是對PCR這種敏感的實驗 影響就會很大
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06/21 14:46, , 15F
我會建議洗完pipetman以後 都用filter tip操作qPCR
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推
06/21 15:42, , 16F
qPCR慘物拿去跑膠啊......
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06/23 03:49, , 17F
ntc應該有作PCR或qPCR都看的懂吧？不過先寫清楚當然較好
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06/26 02:11, , 18F
我有做PCR和qPCR 我就看不懂NTC是啥
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06/26 02:11, , 19F
可以把pipetman拿去曬曬UV 可能就會頭好壯壯
06/26 02:11, 19F
推
07/30 10:34, , 20F
filter tip+1 跑膠也可以馬上看出來 size跟當初設計的一
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07/30 10:35, , 21F
樣就是primer被template汙染 有時候設計片段太小也會溫度
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07/30 10:36, , 22F
overlap 那就重設計吧 我是覺得NTC paper裡常看到啦
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