[求救] 螢光染色實驗背景值
目前實驗是單純只做簡單的螢光實驗~
實驗目的是想將細胞經過光照之後導致細胞凋亡或者壞死
所以使用ANNEXIN V-FITC/PI 方式染色
但是老師希望先做螢光染色判定有沒有就好
實驗步驟是將細胞用 PBS 清洗過後，
先加ANNEXIN V-FITC 染劑 10 分鐘
用 Binding Buffer 清洗3次過後
再加 PI 染劑 5 分鐘
再清洗
然後加入 Binding Buffer 之後，就照螢光顯微鏡
但是目前照出來的結果
染劑都有激發出來，也有順利染上
但是背景值太高
如果將背景值調掉，會連我要拍的細胞都消失
但是將我要拍的細胞亮度調高的話，背景值又太亮
就是亮度不夠，但是我將曝光時間加長也是一樣
目前是排除沒有清洗乾淨~因為我都會清洗3次~並且用shaker慢慢晃
比較有可能的是激發波長不對(不過之前學長姐也是用該濾鏡激發，拍出來很成功)
另一個是染劑太少(染劑量是 97.5μL Binding Buffer+2.5μL ANNEXIN V-FITC 染劑)
除了重染以外，老師是說看能不能將背景值去掉
所以想請教各位，以螢光染色來說
有什麼軟體或方法，可以將已經拍好的圖片，去除背景值?
因為已經試過ImageJ 跟Photoshop了 都無法很漂亮的將背景值去掉
或者是否有做過這個實驗的人~可以給一點建議呢 > <
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.119.63
→
07/11 11:17, , 1F
07/11 11:17, 1F
→
07/11 11:19, , 2F
07/11 11:19, 2F
→
07/11 12:20, , 3F
07/11 12:20, 3F
→
07/11 13:48, , 4F
07/11 13:48, 4F
推
07/11 15:00, , 5F
07/11 15:00, 5F
推
07/11 22:04, , 6F
07/11 22:04, 6F
附上一張圖
http://ppt.cc/0LOc
這是只有 annexin V-FITC 的圖~
因為硬調就很假的感覺~我也不敢亂調~"~
目前看是有染上~因為就在細胞膜外面一圈
目前是打算用蛋白激酶先誘發細胞凋亡做一組負向控制組
AND~
有人建議在染完ANNEXIN V-FITC 之後，先不清洗，直接加入 PI 染色 5分鐘
之後在一起清洗~
就打算先做一組試試了~
※ 編輯: A03692002200 來自: 220.137.114.11 (07/13 02:49)
→
07/13 10:35, , 7F
07/13 10:35, 7F
→
07/13 10:35, , 8F
07/13 10:35, 8F
為何要用 PBS?
※ 編輯: A03692002200 來自: 140.135.101.144 (07/13 15:09)
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
