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[求救] 做細胞transfection的plasmid DNA?

看板Biotech (生命科學)作者 (j31yo20)時間12年前 (2013/07/16 12:39), 編輯推噓5(5推 0噓 17→)
留言22則, 7人參與, 最新討論串1/1
之前有做過把plasmid DNA transfection 進入細胞裡，但是細胞幾乎都死亡了 我的plasmid DNA 是從DH5a萃取出來的，我沒有用去內毒素的kit 我想問的是，做transfection 的plasimd DNA 是不是一定要去內毒素呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.114.191.159
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07/16 12:40, , 1F
打活體的比較需要 用在細胞我也是用普通kit抽的
07/16 12:40, 1F
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07/16 12:40, , 2F
如果是污染的話較可能是回溶用的水或是transfection時問題
07/16 12:40, 2F
推
07/16 12:46, , 3F
沒必要~問題應該是出在你TRANSFECTION的步驟
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07/16 14:01, , 4F
我是用polyjet 的reagent
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07/16 14:02, , 5F
步驟都是照potocol耶
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推
07/16 18:16, , 6F
先告訴大家幾個條件
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07/16 18:17, , 7F
1.cell strain, cell number, 12 wells or 6 wells plate?
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2.amount of DNA, amount of transfection reagent used.
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3.Brand of transfection reagent.
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4.Did you use GFP control plasmid
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推
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不去乾淨LPS也許不會使細胞死亡 但微量的LPS一定干擾data
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07/17 10:17, , 12F
24well, 0.24*10^6 cell/well, 0.5ug DNA per well, polyj
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07/17 10:17, , 13F
et reagent , not use GFP plasmid control
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07/17 10:26, , 14F
cell strain? 2.4*10^5種24well算爆多了@@
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07/17 10:34, , 15F
貼附型細胞:種完貼隔夜後看細胞狀況 健康才做transfection
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細胞是蠻滿的..DNA這個量應該還好 除非polyjet剛好對你的
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細胞毒性特強
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07/17 19:40, , 18F
恩恩 我在做做看吧！THX ALL
07/17 19:40, 18F
推
07/17 22:20, , 19F
應該是polyjet毒性造成的 量稍降低一點
07/17 22:20, 19F
推
07/18 00:08, , 20F
沒有target gene的vector control也會產生細胞死亡現象嗎?
07/18 00:08, 20F
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07/18 08:12, , 21F
這要看你vector上有接什麼會表現出protein的東西啊..
07/18 08:12, 21F
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07/18 11:18, , 22F
正在跟老師討論是否要用control plasmids
07/18 11:18, 22F
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